Extracción de ADN vegetal

Extracción casera de ADN vegetal

Materiales:
*Frutas pulposas (entre más madura esté, mejor) en mi caso un caqui y rúcula.
* Detergente líquido.
* Sal.
* Filtro de cocina.
* Liquido de lentillas
* Alcohol etílico 70º
* Tubo de ensayo.
*Taza y machacador

Procedimiento:
1.Colocar la fruta en una taza y triturar la fruta con el machacador. Es importante que el tejido carnoso de la fruta quede completamente disgregado. (Este paso se conoce como homogenización de tejidos y en los laboratorios usualmente se realiza con nitrógeno líquido y en un mortero de porcelana.)
2.Agregar un par de gotas de Fairy a la fruta triturada.
3.Revolver hasta homogenizar otra vez durante un par de minutos. (Los detergentes son muy buenos para eliminar grasas. En este caso, esas grasas son los lípidos que componen a las membranas celulares y de los diferentes orgánulos: el cloroplasto, la mitocondria, el aparato de Golgi y el retículo endoplasmático, así como el núcleo. Este paso nos permite lisar a las células, es decir, romperlas para liberar su contenido: proteínas, ácidos nucleicos y diferentes metabolitos.)
4. Filtrar sobre el vaso de cristal el extracto de frutas con ayuda de un colador.
5. Agregar unas gotas de líquido de lentillas.(Al lisar a las células se libera una gran cantidad de proteínas, algunas de estas proteínas tienen como función degradar al ADN de patógenos como son las bacterias y los virus. Si no detenemos a estas proteínas (conocidas como nucleasas) nuestro ADN será degradado. Para evitarlo tendremos que agregar el ablandador de carnes, el cual contiene proteasas, es decir, proteínas especializadas en la degradación de otras proteínas.
6.Agregar al jugo una pizca de sal. (Cada hebra de ADN está cargada de manera negativa y como sabemos, las cargas de mismo signo se repelen. Para minimizar esta repulsión electrostática agregaremos una pizca de sal. La sal está compuesta de átomos con carga positiva (el sodio) y negativa (el cloro). Los iones positivos serán atraídos por las cargas negativas del ADN y “apantallaran” a estas cargas, como resultado, la repulsión entre las hebras de ADN disminuirá.)
7. Inclinar el tubo de ensayo y agregar muy lentamente el alcohol al jugo de frutas. (Habrá que hacerlo muy cuidadosamente y procurando que el alcohol resbale por la pared del vaso. El objetivo aquí es crear dos fases: en la parte inferior tendremos una fase del color de nuestra fruta, y en la parte superior una fase transparente (alcohol). El ADN es soluble en agua, pero se precipita en soluciones no polares. El alcohol y la sal nos ayudarán a sacar al ADN del jugo de las frutas. Es importante no mezclar las fases.)
8. Observa con detenimiento qué sucede en la frontera entre las dos fases, es decir, en la interfase. Si nuestra homogenización de tejidos y el lisado de las células fueron eficientes, observaremos unos hilillos blancos en la fase transparente. Después de unos minutos se podrá observar que los hilillos se convierten en aglomerados blancos de consistencia viscosa. Esa sustancia está compuesta por los ácidos nucleicos que estaban contenidos en el interior de las células de la fruta.
9. Utilizar un agitador, palito de madera, varilla de cristal o cuchara para agitar suavemente y en círculos al alcohol, (procura no mezclar las fases). La agitación circular nos permitirá concentrar a nuestra sustancia de ADN en el centro del vaso.
10. Una vez que esté en el centro, intenta sacarlo del alcohol.
11. Ya tenemos nuestro ADN listo.

Con Naomi Muriel Morawe